Imunoelektroforéza sa používa na laboratórne diagnostické zisťovanie monoklonálnych protilátky u pacienta krv. Monoklonálne protilátky sú odvodené z rovnakej bunky a sú namierené proti rovnakým antigénom. Z tohto dôvodu sa považujú za patologické a po zistení naznačujú choroby, ako je Waldenströmova choroba.
Čo je to imunoelektroforéza?
Imunoelektroforéza sa používa na laboratórne diagnostické zisťovanie monoklonálnych protilátky u pacienta krv. Ióny majú rozdielnu pohyblivosť. Táto diferenciálna mobilita je základom metód elektroforézy. Tieto metódy oddeľujú navzájom rôzne látky pomocou elektrických polí a gravitácie. Jednou z dobre známych metód v odbore je imunoelektroferéza. Toto je kvalitatívny diagnostický postup používaný na detekciu monoklonálne protilátky. Protilátky sú imunologicky aktívne proteínové látky špecifickej bunkovej línie. Monoklonálne protilátky všetky pochádzajú z rovnakého B lymfocytu a sú preto namierené proti jedinému epitopu. Akákoľvek prirodzená imunitná reakcia proti inváznym antigénom zodpovedá polyklonálnej reakcii a je teda namierená proti rôznym epitopom. Monoklonálna imunitná odpoveď preto poskytuje dôkazy o patologických procesoch tela. Monoklonálne protilátky viazať rôzne molekuly s vysokou špecifickosťou. Túto väzbu možno zistiť pomocou imunoelektroforéza. Metóda je kvalitatívnym laboratórnym diagnostickým postupom a je zložená z dvoch typov postupov, sérovej elektroforézy a imunodifúzie.
Funkcia, účinok a ciele
Imunoelektroforéza kombinuje metodiku sérovej elektroforézy s imunodifúziou. Pacientovo sérum sa umiestni na agarózový gél alebo film z acetátu celulózy. Aplikuje sa tiež kontrolné sérum. Po aplikácii nasleduje elektroforetická separácia vzoriek. Antiséra, IgG, IgA, IgM, octová kyselina pre normálnu elektroforézu sa medzi separačné čiary použijú kappa a lambda. Toto nastavuje reakciu s protilátkami séra pacienta, ktorá generuje precipitačné čiary. V závislosti od použitého antiséra a polohy a tvaru jednotlivých línií možno vyvodiť závery o imunoglobulíny s obsiahnutými ľahkými reťazcami kappa alebo lambda. V prípade lambda pásu sú prítomné voľné ľahké reťazce protilátok. Pomocou zriedkavých IgE a IgD poskytuje laboratórium ďalšie dôkazy, ktoré umožňujú presné stanovenie imunoglobulíny. Procedúra imunodifúznej elektroforézy sa uskutočňuje podľa Pierra Grabara a Curtisa Williamsa a zodpovedá kombinácii elektroforézy na agarózovom géli proteíny a difúzia protilátky. Najskôr sa uskutoční elektroforéza na agarózovom géle. Potom obsiahnuté protilátky difundujú proti pásom antigénov a tým spôsobujú zrážanie oblúkov. Toto by sa malo odlíšiť od Laurellovej Rocketovej imunoelektroforézy, ktorá zodpovedá elektroforéze proteíny v agarózovom géli, z ktorých každý obsahuje špecifické protilátky koncentrácie. Gél obsahuje mierne zásaditý pufor, ktorý umožňuje migráciu iba antigénov, a tlačí väčšinu protilátok do izoelektrického bodu vystavením mierne zásaditému pH, kým sa neprestanú elektroforeticky pohybovať. Na začiatku Rocketovej imunoelektroforézy je nadbytok antigénu, takže sa tvoria rozpustné komplexy antigén-protilátka. Počas elektroforézy dochádza k ďalšej väzbe medzi antigénmi a ďalšími protilátkami. V bode ekvivalencie sa takto vytvárajú imunoprecipitáty, ktoré pripomínajú raketové figúry s výškou úmernou antigénu koncentrácie. Na vyhodnotenie testu sa meria výška zrazeniny.
Riziká, vedľajšie účinky a nebezpečenstvá
Detekcia monoklonálnych protilátok je obzvlášť dôležitá na diagnostiku mnohopočetného myelómu a Waldenstromovej choroby. Získaná detekcia svedčí o malígnej degenerácii imunitných buniek. Mnohopočetný myelóm zodpovedá a rakovina z kostná dreň charakterizovaná malígnou proliferáciou buniek produkujúcich protilátky v plazme. Tieto plazmatické bunky produkujú protilátky a ich fragmenty. Zhubné plazmatické bunky vždy pochádzajú z bežných progenitorových buniek a sú tak geneticky identické. Produkujú výlučne monoklonálne protilátky. Malignita tohto ochorenia môže zodpovedať prekanceróznemu štádiu, ale môže tiež dosiahnuť vysoko malígne štádium, ktoré je bez liečby rýchlo smrteľné. Príznaky ochorenia sú výsledkom malígneho rastu buniek alebo protilátok a fragmentov protilátok. Medzi najčastejšie príznaky patrí bolesť kostí, rozpúšťanie kostí a spontánne zlomeniny kostí. Vápnik úrovne v EÚ krv sú často zvýšené. Abnormálne protilátky sa navyše často ukladajú v tkanivách a spôsobujú orgánové poruchy, ktoré môžu viesť k prejavom ako napr oblička zlyhanie alebo zhoršený prietok krvi. Waldströmova choroba je tiež zhubné nádorové ochorenie. Presnejšie povedané, je to zhubný nádor lymfóm choroba, ktorá sa klasifikuje ako pomaly progresívna a takmer asymptomatická B-bunkováHodgkinov lymfóm. Vo väčšine prípadov je možné u choroby zistiť abnormálnu tvorbu monoklonálneho IgM, ktorá je spôsobená malígnymi aktivitami. lymfóm bunky. Waldenströmova choroba je svojimi charakteristikami extrémne podobná mnohopočetnému myelómu, zvyčajne však vykazuje priaznivejší priebeh. Väčšina pacientov s Waldenströmovou chorobou je až do stanovenia diagnózy do značnej miery bez príznakov. U ostatných pacientov sa prejavujú skoré príznaky, ako napríklad nešpecifické únava alebo periférne neuropatie, ktoré sú výsledkom ukladania monoklonálneho IgM vo vnútri myelínový obal. Môže spôsobiť aj malé množstvo IgM polyneuropatia. U ostatných pacientov polyneuropatia nedochádza ani pri vysokých hladinách. Ďalej nešpecifické príznaky ako napr horúčka, nežiaduce chudnutie, alebo sa môže vyskytnúť nočné potenie. Bolesti kostí je tiež charakteristická. V dôsledku nadprodukcie IgM sa krv stáva hyperviskoznou, takže vyššie uvedené príznaky môžu byť spojené s príznakmi syndrómu hyperviskozity. Toto sklon ku krvácaniu sa prejavuje vo väčšine prípadov často krvácanie z nosa, bolesti hlavy, celkový pocit malátnosti alebo rozmazaného videnia a akustické ťažkosti. Na detekciu malignít tohto typu sa imunoelektroferéza dlho stala štandardným diagnostickým postupom.
