jedno-gen analýza je cielená metóda genetického testovania.
V rámci tohto postupu pri podozrení na dedičné ochorenie, ktoré je vyvolané jedinou zmenou v a gensa skúma gén podozrivý z príčinnej súvislosti. Toto sa tiež často robí bežne ako súčasť skríningových vyšetrení.
Indikácie (oblasti použitia)
- Diagnóza monogénnych chorôb napr cystická fibróza.
postup
Potrebný materiál
- Heparínová krv (minimálne 1 - 2 ml)
Príprava pacienta
- Nie je potrebné
Rušivé faktory
- Nie sú známe
Laboratórna metóda
Najčastejšie sa používa metóda sekvenovania používaná vgen analýza je Sangerova metóda, ktorá sa tiež nazýva syntéza ukončenia reťazca, kde najskôr dôjde k izolácii DNA z DNA krv. Potom všetko vodík väzby, ktoré slúžia na udržanie dvojvláknovej DNA pohromade, sú prerušené. Po zahrievaní na 94 - 96 ° C po dobu jednej minúty sú prítomné dva jednoduché vlákna. Ďalej nastáva takzvaná hybridizácia primérov, pomocou ktorej je pripojený primér. To sa deje pri asi 60 ° C. Primér je oligonukleotid (oligoméry zložené z niekoľkých nukleotidov), ktorý slúži ako východiskový bod pre replikáciu DNA enzýmy ako je DNA polymeráza. Po hybridizácii primérov sa uskutoční predĺženie, pri ktorom sa teplota zvýši na 72 ° C. Toto umožňuje priméru pripojiť sa k DNA polymeráze (enzýmy ktoré syntetizujú DNA). Po priemerne 30 cykloch je možné procedúru zastaviť.
Ďalšiu analýzu vykonáva kapilárnej elektroforéza v automatizovaných sekvenátoroch. Výsledok sa nazýva elektroferogram. To ukazuje rôzne farby označujúce základnú sekvenciu.
Touto metódou možno detegovať mutácie zahŕňajúce iba jednu nukleovú bázu v géne, známe tiež ako bodové mutácie.
