Detekcia tkanivových štruktúr, protilátkya patogény pomocou imunoznačenia je populárny, moderný a presný. Imunofluorescencia sa týka imunoznačenia pomocou pripravenej fluorescencie protilátky ktoré sú vyrobené tak, aby svietili pod UV svetlom. Pri priamej imunofluorescenčnej detekcii sa testovaný substrát skúma priamo s luminiscenciou protilátky, bez proti smeru primárnych protilátok alebo umelých antigénov.
Čo je priama detekcia imunofluorescencie?
Nádorovo špecifické antigény v nádorovom tkanive je možné detegovať priamo pomocou imunofluorescencie. Je teda možné zistiť, kde v tele existuje metastázy prišiel z. Imunofluorescenčná priama detekcia je diagnostická metóda založená na poznatkoch z imunológie, imunofarbenia a imunohistochémie. Dôraz sa kladie na schopnosť protilátok viazať sa na špecifické miesta v tkanive alebo na antigény v sére. Tieto stránky sú epitopy. V biochemickej diagnostike existujú umelé protilátky alebo mimetiká (singulár: mimetikum), ktoré umožňujú značenie týchto väzieb protilátka-antigén fluorescenciou alebo rádioaktivitou. Konjugáty umelých protilátok sa v skutočnosti viažu na epitopy na jednej strane a na druhej strane majú fluorescenčný marker v prípade imunofluorescencie. Toto je alternatíva k použitiu rádioaktívnych značiek. Špeciálnou vlastnosťou priamych detekcií imunofluorescencie v porovnaní s nepriamymi detekciami je to, že protilátka, ktorá sa viaže na epitop antigénu v skúmanom materiáli, je súčasne už protilátkovým konjugátom s fluorescenčným markerom. Pre priamu detekciu nie sú potrebné ďalšie protilátky na interpozíciu. V imunofluorescencii fluoresceín, ktorý žiari pod UV svetlom, sa ako a používajú fluoresceín izotiokyanát (FITC) farbivá na konštrukciu konjugátov umelej protilátky. Pokiaľ to znie trochu komplikovane, ale imunofluorescenčné priame detekcie sú štandardnými lekárskymi metódami laboratórna diagnostika pre rôzne lekárske problémy. Protilátky obsahujúce fluorescenčné farbivo sú k dispozícii pripravené na predaj.
Funkcia, účinok a ciele
Pre tkanivové štúdie sú k dispozícii priame imunofluorescenčné detektory na farbenie špecifických štruktúr v tkanive. Ale existujú aj pre jednotlivé bunky. Tam hrá prietoková cytometria veľkú úlohu. A nakoniec existujú imunotesty pozostávajúce z pevnej a kvapalnej fázy. Imunofluorescenčné štúdie tkanív sú dôležité predovšetkým v onkológii, tj pri liečbe rakovina. Nádorovo špecifické antigény v nádorovom tkanive je možné detegovať priamo pomocou imunofluorescencie. Tieto vyšetrenia vzoriek tkaniva z nádorov sú často dôležité pre zistenie, kde v tele existujú metastázy pochádzajú alebo tiež za účelom vytvorenia úsudku o tom, či je nádor benígny alebo malígny. Vyšetrenie jednotlivých buniek pomocou imunofluorescenčnej priamej detekcie sa používa na zistenie vírusových antigénov, bakteriálnych antigénov a iných epitopov. Napríklad sa človek dozvie, či sú bunky infikované vírusom a v akom štádiu infekčného cyklu sú bunky. FACS (= Fluorescence-Activated Cell Sorting) je vysoko účinná metóda prietokovej cytometrie, pri ktorej sa fluorescenčne označené bunky distribuujú do rôznych skúmaviek v závislosti od typu farbenia. Táto metóda je dôležitá v imunológii, hematológie a infektológia. Imunofluorescenčné imunotesty umožňujú priamu detekciu environmentálnych toxínov, geneticky modifikovaných organizmov a určitých prídavných látok v potravinách. V tomto experimentálnom usporiadaní vždy existuje tuhá a kvapalná fáza. Početné patogény, vrátane AIDS- spôsobujúci vírus HI, sa dá zistiť aj priamo. Pri zisťovaní infekčných a autoimunitné ochoreniaCieľom je často detekovať skôr protilátky ako antigény. To sú obrany molekuly produkované vlastným telom imunitný systém. Takéto detekcie potom nie sú priamymi detekciami podľa tu uvedenej definície, pretože fluorescenčné protilátky sa nespárujú priamo s vlastnými antigénmi tela, ale s antigénmi testovacej zostavy. Tieto antigény experimentálnej zostavy sa zase viažu na endogénne protilátky. Iba v špeciálnych detekčných a potvrdzovacích testoch sa používajú imunofluorescenčné priame detekcie používané pri bežných infekciách, napríklad pomocou HI. vírusy a Chlamydia. Existujú testy na mnoho ďalších chorôb. Vo väčšine situácií je lepšia nepriama detekcia protilátok infekčné choroby pretože telo imunitný systém má dômyselnú schopnosť pamätať si predchádzajúce infekcie. V iných situáciách sa priama detekcia antigénov a nepriama detekcia protilátok navzájom dopĺňajú. Posledné uvedené ukazujú, že k infekcii došlo už skôr, zatiaľ čo prvé poskytujú presnejšie informácie o súčasnom stave aktivity patogénov.
Riziká, vedľajšie účinky a nebezpečenstvá
Pri priamej detekcii imunofluorescencie, ako pri každej lekárskej detekcii, prichádzajú dve riziká: Riziko falošne pozitívneho výsledku a riziko falošne negatívneho výsledku. Falošné pozitívne výsledky spôsobujú pacientovi psychologické nepohodlie a veľmi veľké utrpenie. Preto sa k pozitívnym výsledkom pridávajú ďalšie testovacie postupy, najmä ak diagnóza vedie k drastickým zmenám v živote. Nebezpečenstvo falošne negatívneho výsledku je, že sa pacient nedozvie včas o svojej hrozbe zdravie a možno dokonca aj pre verejné zdravie. Preto je dobré urobiť si rozsiahly výskum a pripraviť na predaj veľké množstvo rôznych priamych detekcií imunofluorescencie a ponúknuť ich. Spolu s ďalšími priamymi a nepriamymi detekčnými metódami chorôb a patológií to zvyšuje presnosť diagnostiky. Priame detekcie sú založené na konjugáte protilátky, ktorý sa na jednej strane viaže na epitopy antigénov a na druhej strane súčasne spôsobuje fluorescenciu. Takýto výrobok sa preto používa iba v jednom druhu skúšobného postupu a nepoužíva sa na iné typy skúšok. Toto je dôležitý, procedurálny rozdiel od nepriamej detekcie, pri ktorej sa primárne protilátky používajú pred fluorescenčnými protilátkami na väzbu na epitop. Konjugát protilátky je teda vhodný pre rôzne testy. Tento procedurálny rozdiel sa líši od medicínskeho rozdielu medzi nepriamou detekciou protilátok a priamou detekciou antigénov.
