Fluorescencia v situ hybridizácii

Fluorescenčná in situ hybridizácia (FISH) je genetická skríningová metóda na detekciu DNA (deoxyribonukleová kyselina) v jadrách jednotlivých buniek.

Táto metóda spočíva v použití špecifických sond DNA, ktoré môžu poskytnúť iba informácie o genomických oblastiach, pre ktoré je sonda použitá špecifická.

Indikácie (oblasti použitia)

  • Podozrenie z numerickej chromozomálnej aberácie:
    • Zistenie numerických chromozomálnych abnormalít (napr. Trizómia 21).
    • Na kvantifikáciu mozaiky pre chromozomálne aberácie (napr. V Ullrich-Turnerov syndróm).
  • Detekcia na mikrodelecie (napr. Monozómia 22q11.2).
  • Detekcia chromozomálnych aberácií (napr. chronickej lymfocytovej leukémie (CLL), non-Hodgkin lymfóm).

Vyššie uvedené indikácie sa analyzujú interfázovou FISH (podrobnosti pozri v časti „Laboratórny postup“).

postup

Potrebný materiál

  • Heparínová krv (minimálne 1 - 2 ml)

Príprava pacienta

  • Nie je potrebné

Rušivé faktory

  • Nie sú známe

Laboratórna metóda

Fluorescenčná in situ hybridizácia (FISH) zahrnuje použitie fluorescenčne označených sond DNA (sondy FISH). Môžu sa viazať na konkrétne miesto DNA na chromozóme, ktoré sa nazýva hybridizácia. Po alebo po naviazaní fluorescenčne značenej sondy sa môže hodnotenie uskutočniť pomocou mikroskopu. V tomto procese sa určuje počet fluorescenčných signálov v medzifázových jadrách. Ďalej hodnotenie miesta (napr. Translokácie / posunu miesta / do iného chromozómu) v metafáze chromozómy je možné.

Keď rôzne fluorescenčné farbivá sa používajú pri rôznych cieľových DNA v postupe FISH, označuje sa to ako viacfarebná FISH. To umožňuje úplnú vizualizáciu genómu.

V niektorých prípadoch nie je sonda DNA priamo označená fluorescenčným farbivom, čo sa nazýva nepriamy postup. Namiesto toho je označený látkami ako napr biotín alebo digoxigenín. Táto metóda sa považuje za komplikovanejšiu, ale je citlivejšia.